therapeuticЮжно-Российский журнал терапевтической практикиSouth Russian Journal of Therapeutic Practice2712-8156РостГМУ10.21886/2712-8156-2023-4-1-97-105therapeutic-328Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯORIGINAL RESEARCHНекоторые итоги пилотного исследования мутаций в генах ASXL1 и DNMT3A при миелодиспластическом синдромеSome results of a pilot study of mutations in ASXL1 and DNMT3A genes in myelodysplastic syndromehttps://orcid.org/0000-0002-3220-2753ЛипилкинП. В.LipilkinP. V.

Липилкин Павел Викторович, старший преподаватель кафедры «Биология и общая патология»

Ростов-на-Дону

Pavel V. Lipilkin, senior lecturer of the Department of Biology and general pathology

Rostov-on-Don

plipilkin@donstu.ruhttps://orcid.org/0000-0001-5886-7975КулаеваЕ. Д.KulaevaE. D.

Кулаева Елизавета Дмитриевна, лаборант-исследователь, научно-исследовательская лаборатория кафедры генетики «Биология развития и организации генома», НИИ биологии

Ростов-на-Дону

Elizaveta D. Kulaeva, research assistant, Department of Genetics, Biology of development and genome organisation laboratory, Research Institute of Biology

Rostov-on-Don

ekulaeva@sfedu.ruhttps://orcid.org/0000-0001-7382-8827РябикинаЕ. В.RyabikinaE. V.

Рябикина Елена Витальевна, к.м.н., доцент кафедры гематологии и трансфузиологии (с курсом клинической лабораторной диагностики, генетики и лабораторной генетики)

Ростов-на-Дону

Elena V. Ryabikina, assistant professor of the Department of Hematology and Transfusiology with a Сourse of Сlinical Laboratory Diagnostics, Genetics and Laboratory Genetics

Rostov-on-Don

ryabikina_ev@rostgmu.ruhttps://orcid.org/0000-0002-3286-3930ДегтереваЕ. В.DegterevaE. V.

Дегтерева Елена Валентиновна, к.м.н., доцент кафедры гематологии и трансфузиологии (с курсом клинической лабораторной диагностики, генетики и лабораторной генетики)

Ростов-на-Дону

Elena V. Degtereva, assistant professor of the Department of Hematology and Transfusiology with a Сourse of Сlinical Laboratory Diagnostics, Genetics and Laboratory Genetics

Rostov-on-Don

degtereva_ev@rostgmu.ruhttps://orcid.org/0000-0003-2246-2858ШатохинЮ. В.ShatokhinYu. V.

Шатохин Юрий Васильевич, д.м.н., профессор кафедры гематологии и трансфузиологии (с курсом клинической лабораторной диагностики, генетики и лабораторной генетики)

Ростов-на-Дону

Yuri V. Shatokhin, MD, professor of the Department of Hematology and Transfusiology with courses in clinical laboratory diagnostics, genetics and laboratory genetics

Rostov-on-Don

shatokhinyv@yandex.ruФГБОУ ВО «Ростовский государственный медицинский университет» Минздрава России; ФГБОУ ВО «Донской государственный технический университет»РоссияRostov State Medical University; Don State Technical UniversityRussian FederationФГАОУ «Южный федеральный университет»Southern Federal UniversityФГБОУ ВО «Ростовский государственный медицинский университет» Минздрава РоссииRostov State Medical University2023280320234197105Copyright © Липилкин П.В., Кулаева Е.Д., Рябикина Е.В., Дегтерева Е.В., Шатохин Ю.В., 20232023Липилкин П.В., Кулаева Е.Д., Рябикина Е.В., Дегтерева Е.В., Шатохин Ю.В.Lipilkin P.V., Kulaeva E.D., Ryabikina E.V., Degtereva E.V., Shatokhin Y.V.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.therapeutic-j.ru/jour/article/view/328

Цель: определить распространённость мутации c.1934dupG в гене ASXL1 и мутации R882H в гене DNMT3A при миелодиспластическом синдроме и их влияние на значимые клинические характеристики. Материалы и методы: в исследование были включены 33 мужчины и 17 женщин с медианным возрастом 57 лет (18–83) и верифицированным диагнозом миелодиспластического синдрома. В качестве контроля были взяты 22 добровольца без гематологической патологии, (8 мужчин, 14 женщин, от 22 до 65 лет). Во всех исследуемых группах было проведено ПЦР-исследование венозной крови с целью детекции мутаций c.1934dupG и R882H с помощью адаптированных способов анализа эффективности амплификации и рестрикционной аллель-специфической ПЦР с референсным секвенированием по Сенгеру. Результаты: мутация R882H не была обнаружена ни в одной из исследуемых групп. Мутация c.1934dupG не была обнаружена у лиц без гематологической патологии. Из-за недостатка концентрации выделенной ДНК из клеток венозной крови не удалось произвести анализа эффективности амплификации у 7 пациентов. Мутация c.1934dupG была обнаружена у 46% пациентов и встречается во всех группах риска по шкале IPSS-R, WPSS и MDS-CI. Не найдено различий при анализе выживаемости при наличии и отсутствии мутации c.1934dupG. Выводы: исследование показало, что разработанный способ по детекции мутации c.1934dupG в клетках венозной крови позволяет совершить оптимизацию молекулярно-генетической диагностики. Ограничением для проведения адаптированных анализов эффективности амплификации и рестрикционного анализа являлась степень лейкопении крови. Не было обнаружено влияния мутации c.1934dupG на клиническое течение миелодиспластического синдрома при сравнении некоторых твёрдых и суррогатных конечных точек исследования. 

Оbjective: was to determine the prevalence of the c.1934dupG mutation in the ASXL1 gene and the R882H mutation in the DNMT3A gene in MDS and their influence on significant clinical characteristics. Materials and methods: 33 men and 17 women with a median age of 57 years (18 –83) and a verified diagnosis of myelodysplastic syndrome were included in the study. Twenty-two volunteers without hematologic pathology were taken as controls, of them: 8 men and 14 women aged from 22 to 65 years. PCR examination of venous blood was performed in all study groups to detect c.1934dupG and R882H with Sanger reference sequencing. Results: the R882H mutation was not detected in any of the study groups. The c.1934dupG mutation was not detected in individuals without hematologic pathology. Due to a lack of concentration of isolated DNA from venous blood cells, no analysis of amplification efficiency could be performed in 7 patients. The c.1934dupG mutation was found in 46% of patients and was found in all IPSS-R, WPSS, and MDS-CI risk groups. No differences were found in the analysis of survival in the presence and absence of the c.1934dupG mutation. Conclusions: the study demonstrated that the developed method for the detection of the c.1934dupG mutation in venous blood cells enables optimization of diagnosis. A limitation of the adapted amplification and restriction assays was the degree of blood leucopenia. No effect of the c.1934dupG mutation on the clinical course of myelodysplastic syndrome was detected.

эпигенетические регуляторымутациимиелодиспластический синдромepigenetic regulatorsmutationsmyelodysplastic syndromeReferencesPati H, Kundil Veetil K. Myelodysplastic Syndrome/ Myeloproliferative Neoplasm (MDS/MPN) Overlap Syndromes: Molecular Pathogenetic Mechanisms and Their Implications. Indian J Hematol Blood Transfus. 2019;35(1):3-11. doi: 10.1007/s12288-019-01084-yPati H, Kundil Veetil K. Myelodysplastic Syndrome/ Myeloproliferative Neoplasm (MDS/MPN) Overlap Syndromes: Molecular Pathogenetic Mechanisms and Their Implications. Indian J Hematol Blood Transfus. 2019;35(1):3-11. doi: 10.1007/s12288-019-01084-yHeuser M, Yun H, Thol F. Epigenetics in myelodysplastic syndromes. Semin Cancer Biol. 2018;51:170-179. doi: 10.1016/j.semcancer.2017.07.009Heuser M, Yun H, Thol F. Epigenetics in myelodysplastic syndromes. Semin Cancer Biol. 2018;51:170-179. doi: 10.1016/j.semcancer.2017.07.009Ganguly BB, Kadam NN. Mutations of myelodysplastic syndromes (MDS): An update. Mutat Res Rev Mutat Res. 2016;769:47-62. doi: 10.1016/j.mrrev.2016.04.009Ganguly BB, Kadam NN. Mutations of myelodysplastic syndromes (MDS): An update. Mutat Res Rev Mutat Res. 2016;769:47-62. doi: 10.1016/j.mrrev.2016.04.009Lin Y, Zheng Y, Wang ZC, Wang SY. Prognostic significance of ASXL1 mutations in myelodysplastic syndromes and chronic myelomonocytic leukemia: A meta-analysis. Hematology. 2016;21(8):454-461. doi: 10.1080/10245332.2015.1106815Lin Y, Zheng Y, Wang ZC, Wang SY. Prognostic significance of ASXL1 mutations in myelodysplastic syndromes and chronic myelomonocytic leukemia: A meta-analysis. Hematology. 2016;21(8):454-461. doi: 10.1080/10245332.2015.1106815Gelsi-Boyer V, Brecqueville M, Devillier R, Murati A, Mozziconacci MJ, Birnbaum D. Mutations in ASXL1 are associated with poor prognosis across the spectrum of malignant myeloid diseases. J Hematol Oncol. 2012;5:12. doi: 10.1186/1756-8722-5-12Gelsi-Boyer V, Brecqueville M, Devillier R, Murati A, Mozziconacci MJ, Birnbaum D. Mutations in ASXL1 are associated with poor prognosis across the spectrum of malignant myeloid diseases. J Hematol Oncol. 2012;5:12. doi: 10.1186/1756-8722-5-12Katoh M. Functional and cancer genomics of ASXL family members. Br J Cancer. 2013;109(2):299-306. doi: 10.1038/ bjc.2013.281Katoh M. Functional and cancer genomics of ASXL family members. Br J Cancer. 2013;109(2):299-306. doi: 10.1038/ bjc.2013.281Montes-Moreno S, Routbort MJ, Lohman EJ, Barkoh BA, Kanagal-Shamanna R, Bueso-Ramos CE, et al. Clinical molecular testing for ASXL1 c.1934dupG p.Gly646fs mutation in hematologic neoplasms in the NGS era. PLoS One. 2018;13(9):e0204218. doi: 10.1371/journal.pone.0204218Montes-Moreno S, Routbort MJ, Lohman EJ, Barkoh BA, Kanagal-Shamanna R, Bueso-Ramos CE, et al. Clinical molecular testing for ASXL1 c.1934dupG p.Gly646fs mutation in hematologic neoplasms in the NGS era. PLoS One. 2018;13(9):e0204218. doi: 10.1371/journal.pone.0204218Wang L, Birch NW, Zhao Z, Nestler CM, Kazmer A, Shilati A, et al. Epigenetic targeted therapy of stabilized BAP1 in ASXL1 gain-of-function mutated leukemia. Nat Cancer. 2021;2(5):515-526. doi: 10.1038/s43018-021-00199-4Wang L, Birch NW, Zhao Z, Nestler CM, Kazmer A, Shilati A, et al. Epigenetic targeted therapy of stabilized BAP1 in ASXL1 gain-of-function mutated leukemia. Nat Cancer. 2021;2(5):515-526. doi: 10.1038/s43018-021-00199-4Walter MJ, Ding L, Shen D, Shao J, Grillot M, McLellan M, et al. Recurrent DNMT3A mutations in patients with myelodysplastic syndromes. Leukemia. 2011;25(7):1153-1158. doi: 10.1038/ leu.2011.44Walter MJ, Ding L, Shen D, Shao J, Grillot M, McLellan M, et al. Recurrent DNMT3A mutations in patients with myelodysplastic syndromes. Leukemia. 2011;25(7):1153-1158. doi: 10.1038/ leu.2011.44Xu F, Wu LY, He Q, Wu D, Zhang Z, Song LX, et al. Exploration of the role of gene mutations in myelodysplastic syndromes through a sequencing design involving a small number of target genes. Sci Rep. 2017;7:43113. doi: 10.1038/srep43113Xu F, Wu LY, He Q, Wu D, Zhang Z, Song LX, et al. Exploration of the role of gene mutations in myelodysplastic syndromes through a sequencing design involving a small number of target genes. Sci Rep. 2017;7:43113. doi: 10.1038/srep43113Xu Y, Li Y, Xu Q, Chen Y, Lv N, Jing Y, et al. Implications of mutational spectrum in myelodysplastic syndromes based on targeted next-generation sequencing. Oncotarget. 2017;8(47):82475-82490. doi: 10.18632/oncotarget.19628Xu Y, Li Y, Xu Q, Chen Y, Lv N, Jing Y, et al. Implications of mutational spectrum in myelodysplastic syndromes based on targeted next-generation sequencing. Oncotarget. 2017;8(47):82475-82490. doi: 10.18632/oncotarget.19628Greenberg PL, Tuechler H, Schanz J, Sanz G, Garcia-Manero G, Solé F, et al. Revised international prognostic scoring system for myelodysplastic syndromes. Blood. 2012;120(12):2454- 2465. doi: 10.1182/blood-2012-03-420489Greenberg PL, Tuechler H, Schanz J, Sanz G, Garcia-Manero G, Solé F, et al. Revised international prognostic scoring system for myelodysplastic syndromes. Blood. 2012;120(12):2454- 2465. doi: 10.1182/blood-2012-03-420489Malcovati L, Della Porta MG, Strupp C, Ambaglio I, Kuendgen A, Nachtkamp K, et al. Impact of the degree of anemia on the outcome of patients with myelodysplastic syndrome and its integration into the WHO classification-based Prognostic Scoring System (WPSS). Haematologica. 2011;96(10):1433- 1440. doi: 10.3324/haematol.2011.044602Malcovati L, Della Porta MG, Strupp C, Ambaglio I, Kuendgen A, Nachtkamp K, et al. Impact of the degree of anemia on the outcome of patients with myelodysplastic syndrome and its integration into the WHO classification-based Prognostic Scoring System (WPSS). Haematologica. 2011;96(10):1433- 1440. doi: 10.3324/haematol.2011.044602Della Porta MG, Malcovati L, Strupp C, Ambaglio I, Kuendgen A, Zipperer E. Risk stratification based on both disease status and extra-hematologic comorbidities in patients with myelodysplastic syndrome. Haematologica. 2011; 96(3):441- 9. doi: 10.3324/haematol.2010.033506Della Porta MG, Malcovati L, Strupp C, Ambaglio I, Kuendgen A, Zipperer E. Risk stratification based on both disease status and extra-hematologic comorbidities in patients with myelodysplastic syndrome. Haematologica. 2011; 96(3):441- 9. doi: 10.3324/haematol.2010.033506

The authors declare that there are no conflicts of interest present.